Description:

Invenţia se referă la un instrument şi la o metodă pentru izolarea celulelor somatice din lapte prin centrifugare, utilizate în pregătirea probelor de lapte pentru analize de citometrie în flux. Instalaţia conform invenţiei este constituită dintr-o piesă (1) cilindrică cavă de tip pahar realizată din materiale plastice sterilizabile prin autoclavare, în care central şi axial, la partea inferioară deschisă, este prelungită cu o tijă elicoidală de tip tirbuşon care pătrunde în cavitatea cilindrică a unei eprubete (2), pe capătul căreia se asamblează prin alunecare şi presare piesa (1) astfel încât, în procesul de centrifugare a laptelui, pe tija elicoidală a piesei (1) se aglomerează şi se ataşează lipidele din laptele centrifugat, formând un dop (3) cilindric din lipide care se detaşează după scoaterea piesei (1) din eprubeta (2) şi rotirea piesei (1) cu dopul (3) cilindric imobilizat. Metoda conform invenţiei constă în colectarea laptelui în tuburi sterile de polipropilenă cu diametrul de 15...50 ml păstrate maximum 4 ore de la colectare la o temperatură de 2...8°C, pentru fiecare probă pregătindu-se câte un flacon steril de 50 ml pe care se aşează câte un filtru steril de 40 μm, se filtrează 10 ml de lapte/probă şi se diluează cu 10 ml PBS steril rece, se centrifughează timp de 20 minute la 4°C, 500 x G, se îndepărtează lipidele cu ajutorul instrumentului şi se aspiră supernatantul, se resuspendă sedimentul celular în 1 ml PBS rece şi se transferă într-un tub de 5 ml, se adaugă 2 ml PBS rece şi se centrifughează 500 x G, timp de 10 minute la o temperatură de 4°C, se îndepărtează supernatantul, se resuspendă sedimentul celular în 1 ml PBS rece numărându-se celulele cu un hemocitometru, se adaugă 1 ml PBS rece şi se centrifughează la 500 xG timp de 10 minute la 4°C, se îndepărtează supernatantul, se resuspendă sedimentul în PBS la o concentraţie de 106 celule/ml şi se păstrează la 2...8°C până la marcare în vederea efectuării citometriei în flux.