Description:

Prezenta invenţie se referă la un procedeu de obţinere a merkerului enzimatic acid 3,6-dicloro-2-metoxi benzoil-CO-NH-(CH)-N=CH-(CH)-CH=N-fosfataza alcalină, utilizat în tehnica ELISA, pentru dozarea pesticidului din probe biologice şi de mediu. Procedeul conform invenţiei presupune dizolvarea a 50 mg acid 3,6-dicloro-2-metoxi benzoic, 100 mg N-hidroxisuccinimidă şi 100 mg carbodiimidă în 2 ml dimetilformamidă, şi agitarea amestecului activat cu o soluţie de 10 mg de hexametilendiamină în tampon carbonat de sodiu 50 mM, pH = 9,6, amestecul fiind lăsat să reacţioneze timp de 4 h, apoi cromatografiat pe Silicagel tip G, iar 100 microl de soluţie de derivat pesticidic purificat 1 mg/ml în tampon fosfat 10 mM, pH = 8, şi 100 microl fosfatază alcalină 10 mg/ml sunt amestecate cu o soluţie de glutaraldehidă 0,1% şi lăsate să reacţioneze timp de 2 h, reacţia fiind apoi oprită prin adaos de 50 microl soluţie de glicină 100 mg/ml, în tampon fosfat pH = 8, urmat de cromatografia amestecului de reacţie pe Sephadex G25 şi markerul enzimatic purificat astfel obţinut este depozitat la -18°C, în vederea utilizării în tehnica ELISA de dozare pesticidică.